抑菌試驗詳細步驟 抑菌效果檢測方法

487次 2024.07.05

    抑菌是指抑制細菌生長和繁殖,使細菌的數(shù)量不會增長。抑菌不一定能殺滅細菌,但能防止細菌數(shù)量過多而導(dǎo)致危害。抑菌試驗是一種常用的實驗方法,用于評估抗菌劑的抑菌效果。其基本原理是將待測物質(zhì)與細菌接觸,觀察其對細菌生長的影響。


    抑菌試驗詳細步驟


    抑菌圈測量是微生物分析的經(jīng)典方法。它是利用抑菌物質(zhì)在涂布特定試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)成球形立體狀擴散,抑制試驗菌的繁殖,在抑菌物質(zhì)的周圍形成透明圈,即抑菌圈。抑菌圈的測定(濾紙片法)詳細步驟如下:


    1、菌種接種:將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次,使菌種新鮮,細菌置30℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,霉菌置27℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d,備抗菌實驗用


    2、菌懸液制備:在超凈臺里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL),接種環(huán)輕刮菌落,搖晃,置旋渦混合器混勻。


    3、倒平板:在超凈臺里將培養(yǎng)基倒入平板,每板約15mL左右,水平放置,凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,2d后觀察是否有菌落生長,若沒有則可供下一步實驗使用,否則需重新倒平板。


    4、涂布:在超凈臺里用槍取0.1ml菌懸液注入平板,放置5min左右后用三角耙涂布均勻,每種菌設(shè)置兩個重復(fù)平板。


    5、貼片:在超凈臺里將平板平均分為6個區(qū),對角設(shè)置平行組,同時用無菌水做對照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對照。每兩張濾紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼,用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后,取出貼在平板的位置,輕摁一下使濾紙片牢固,置(正放)4℃冰箱中放24h。


    6、培養(yǎng):24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細菌30℃,霉菌27℃。細菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,霉菌72h后觀察結(jié)果。


    抑菌效果檢測方法


    1.紙片擴散法:將待測物質(zhì)涂在紙片上,放置在含有細菌的瓊脂平板上,觀察紙片周圍的細菌生長情況,評估抑菌效果。


    2.微量稀釋法:將待測物質(zhì)按照一定比例稀釋,與細菌混合,放置在瓊脂平板上,觀察細菌生長情況,根據(jù)最小抑菌濃度評估抑菌效果。


    3.漏斗法:將待測物質(zhì)滴入含有細菌的培養(yǎng)基中,通過漏斗篩選,觀察細菌生長情況,評估抑菌效果。


    4.懸浮液法:將待測物質(zhì)與細菌混合,放置在離心管中,離心后觀察沉淀情況,評估抑菌效果。


    以上是幾種常用的抑菌試驗方法。不同的方法適用于不同的實驗需求。在進行抑菌試驗時,需要注意實驗條件的控制,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。


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